程序降温盒（程序降温盒直接从80拿出来使用）

程序降温盒

5.冻存管放入程序降温盒，程序降温盒，放入超低温冰箱中过夜。

程序降温盒（程序降温盒直接从80拿出来使用）

对于大多数动物细胞，降温速率通常每分钟下降1至3℃。的方法是使用程序降温系统。其次可以使用程序降温盒，虽然这种方法适用于许多细胞系，但不能提供均匀可控的冷却，不建议用于珍贵细胞。

6.从超低温冰箱中取出程序降温盒，取出冻存管迅速浸入液氮中。

细胞储存应始终保持温度低于-130°C。细胞可以在更高的温度下保存，但生存力通常会随着时间的推移而降低。理想的储存容器是液氮罐，出于安全原因，优选选择液氮储存。

论使用哪种冻存方法，关键的是快速高效地将其传输到存储位置。如果不能立即完成，可以将小瓶置于干冰上一段时间。这样可以避免在转移过程中发生温度升高而损害细胞，在这个转移过程中温度升高是解冻后影响细胞活力的主要原因。

程序降温盒直接从80拿出来使用

5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。

02

细胞冻存细节注意

1.冻存步骤中包含了消化的大部分步骤。

2.冻存液常规配比为培养基：血清：DMSO=7:2:1，如果细胞比较珍贵，可以调整为血清：DMSO=9:1；

3.如果没有程序降温盒，程序降温盒，可以将冻存细胞依次放于4度1h，-20度2h，-80过夜，程序降温盒，大部分细胞也可以适应，但原代细胞不建议这么处理；

4.冻存细胞储存在-80度中通常不建议超过半年，液氮中通常不建议超过2年；

5.细胞如果是第一次养，建议至少冻存两个批次以上，以尽量避免因为冻存问题导致细胞绝种；

另外，还有一些是无血清培养的细胞，也不能添加血清，这时就用无血清培养基（根据细胞特性定制的培养基）加入5-10%的DMSO来冻存。

程序降温盒的使用方法

细胞冻存原则为“慢冻”，即让细胞在缓慢降温的条件下逐渐冷冻。

如果直接将细胞悬液放在超低温下快速冷冻，细胞会受到冷冻损伤而死亡。在冻存液中添加的保护剂（如DMSO、甘油）和在冻存盒中添加的异丙醇，都起到程序性降温的作用。

DMSO使用注意事项

DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，延缓温度下降速度，减少细胞内冰晶的形成，从而起到保护细胞的作用。

需注意的是，DMSO溶于培养基时，将释放大量热量，所以细胞冻存液需提前配制，不能直接将DMSO加入含有细胞的培养基中，避免烫伤细胞。

另外，DMSO属于致癌物质，使用时应戴好手套，规范操作。

程序冻存液配方

程序冻存液成分一般由基础培养基、胎牛血清、DMSO组成。血清比例为10%~90%，DMSO比例为5%~10%。根据普诺赛实验室细胞培养经验，推荐冻存液配比：55%基础培养基＋40%胎牛血清＋5%DMSO，程序降温盒，难养细胞可用90%胎牛血清＋10%DMSO冻存。