AIM自诱导培养基介绍（zym自诱导培养基）

自诱导培养基(lac启动子)(Auto-inductionMedium)

产品及特点

本产品是在pET专用生长培养基的基础上开发而成的,它利用E.coli自身对培养基中碳源和能源的调控利用机制,实现外源蛋白在细菌达到饱和期后的自动诱发。

AIM自诱导培养基介绍（zym自诱导培养基）

具有下列特点:

1.不需添加任何IPTG或相关诱导物,节约成本。

2.免去了密切监控菌液密度的过程,尤其适合大规模筛选。

3.细菌生长密度远高于IPTG诱导表达系统。

4.外源蛋白表达量远远高于IPTG诱导表达系统。

5.本产品即开即用,操作简单。

6.与各种细胞培养容器兼容(如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等)。

自诱导培养基(lac启动子)(Auto-inductionMedium)

操作步骤

(一)获得目的基因

1

、通过

PCR

方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),

PCR

循环获得所需基因片段。

2

、通过

RT-PCR

方法:用

TRIzol

法从细胞或组织中提取总

RNA

,以

mRNA

为模板,逆转录形成

cDNA

第一链,以逆转录产物为模板进行

PCR

循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1

、

自诱导培养基(lac启动子)(Auto-inductionMedium)

载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收

Kit

或冻融法回收载体大片段。

2

、

PCR

产物双酶切后回收,在

T4DNA

连接酶作用下连接入载体。

(三)

获得含重组表达质粒的表达菌种

1

、

将连接产物转化大肠杆菌

DH5

α,根据重组载体的标志(抗

Amp

或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2

、

测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确

,

进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3

、

以此重组质粒

DNA

转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1

、

自诱导培养基(lac启动子)(Auto-inductionMedium)

挑取含重组质粒的菌体单斑至

2mlLB

(含

Amp50

μ

g/ml

)中

37

℃过夜培养。

2

、按

1

∶

50

比例稀释过夜菌,一般将

1ml

菌加入到含

50mlLB

培养基的

300ml

培养瓶中

,37

℃震荡培养至

OD600

≌

0.4-1.0

(*

0.6

,大约需

3hr

)。

3

、取部分液体作为未诱导的对照组

,

余下的加入

IPTG

诱导剂至终浓度

0.4mM

作为实验组

,

两组继续

37

℃震荡培养

3hr

。

4

、分别取菌体

1ml,

离心

12000g

×

30s

收获沉淀,用

100

μ

l1%SDS

重悬,混匀

,70

℃

10min

。

5

、离心

12000g

×

1min

,取上清作为样品

,

可做

SDS-PAGE

等分析。

自诱导培养基常见种类