质粒提取试剂盒（质粒抽提试剂盒）

大家好，如果您还对质粒提取试剂盒不太了解，没有关系，今天就由本站为大家分享质粒提取试剂盒的知识，包括质粒抽提试剂盒的问题都会给大家分析到，还望可以解决大家的问题，下面我们就开始吧！

本文主要内容一览

• 1、手动提取质粒和试剂盒提取质粒的区别
• 2、质粒提取试剂盒需要放20吗
• 3、质粒提取的注意事项
• 4、质粒小提试剂盒中的p1p2p3分别有什么作用
• 5、植物基因工程实验技术提取质粒

质粒提取试剂盒（质粒抽提试剂盒）

1手动提取质粒和试剂盒提取质粒的区别

方便、节省时间。1、方便。手动提取程序复杂，工序多，试剂盒提取自动化，简单便捷。2、节省时间。试剂盒提取比手动提取节省50%的时间。

质粒提取试剂盒（质粒抽提试剂盒）

2质粒提取试剂盒需要放20吗

需要。质粒提取试剂盒需要放-20。现在用质粒提取试剂盒非常方便，而且菌体培养后，可以多管浓缩提取，提到的质粒量多，可以-20℃保存，以后用于酶切、转化等实验，可以提前跑个胶，只要不降解，就可以继续用，避免每次要用，都要培养一遍再提取一遍。

3质粒提取的注意事项

1、利用氯霉素抑制染色体的复制，而不抑制质粒的复制这一特点，在低拷贝质粒（如pUC19）的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。

2、RNA的去除，首先是使用RNase消化。在溶液I中加入高浓度的RNaseA(100ug/ml)，或者用含25ugRNaseA/mlTE溶解抽提好的质粒，都可以降低RNA残留，但都不能彻底去除。

3、蛋白质的去除，主要是靠不溶解的K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于4C一段时间，可以形成更多的该不溶复合物，从而使蛋白质残留更少，但实践证明这样做并不是必须的，除非是大量抽提。

首先，质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取，可以根据实验的不同需求，选择相应的试剂盒。

质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取，获得的质粒可以用于常规的载体构建，一般适用于5ml以下菌液。

而质粒中提，在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素，获得的质粒可以用于细胞转染，常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同，可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。

扩展资料

质粒提取的原理：质粒抽提的步骤原理即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。最常用的方法是碱裂解法,即在强碱性条件下，质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来，并发生变性。

在pH中性，并有高盐浓度存在的条件下，质粒DNA会迅速发生复性，仍为可溶性状态，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构，在去垢剂SDS作用下，染色体DNA与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，通过离心去除沉淀后。

再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA，用异丙醇或乙醇沉淀可将之纯化出来。优点为操作过程简单，快速，获得质粒浓度高，目前被广泛使用。

参考资料来源：百度百科-质粒抽提

4质粒小提试剂盒中的p1p2p3分别有什么作用

P1作用是悬菌，使菌体分散。

P2是强碱，作用是裂解菌体。

大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA提取出来。

配方是：

1Mol/LTris-Hcl（pH8.0）25mL

0.5Mol/LEDTA-NaOH(pH8.0)20mL

20%葡萄糖45mL

H2O910mL

Rnase（RNA酶，zhi100U）10-20uL

扩展资料：

用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取，它结合了优化的碱裂解法，以及方便快捷的硅膜离心技术，具有高效，快捷的特点，能在30min内完成全部操作。利用试剂盒能从1-5mL过夜培养的大肠杆菌菌液中纯化得到10-40μg高质量的质粒DNA（OD260/OD280=1.7-1.9），此质粒DNA可直接用于DNA序列分析，各种酶促反应，PCR以及部分细胞系的转染等。

其中用到三种溶液以及硅酸纤维膜（超滤柱）。溶液Ⅰ：50mM葡萄糖/25mMTris-HCl/10mMEDTA，pH8.0；溶液Ⅱ：0.2NNaOH/1%SDS；溶液Ⅲ：3M醋酸钾/2M醋酸/75%酒精。

参考资料来源：百度百科-质粒抽提

5植物基因工程实验技术提取质粒

EP管是一种小型的离心管,又称为EP(eppendorf)管。可以与微型离心机配套使用,用于微量试剂的分离 微量离心管离心。

rpm（离心机的转速单位，转rpm，以下简写为r）

提取大肠杆菌中的质粒

查看预约离心机，相应抗生素LB液体要有，管子要有灭好的

摇菌不能超16h

低拷贝数质粒的纯化

从过夜培养的菌液中纯化得到的低拷贝质粒的得率大约为 0.1-1 μg/mL，若要提取中低拷贝数的质粒 DNA，请遵循以下准则：

培养体积：使用高拷贝质粒菌培养基的 2 倍体积。

使用 2 倍体积的 Buffer A1，B1，N1，这些缓冲液可单独向 Biomiga 购买。

使用与高拷贝质粒菌相同体积的 DNA Wash Buffer、Buffer KB

1.提前准备

预约离心机，打开金属浴设定60℃，将EB/ddH2O预热，

拿大盘子准备：枪（1000 5min 轻转10次

+350ul N1 轻转10次，关键是混合均匀

12000r 10min

枪移液至柱子 12000r 1min 弃废液-挂质粒

+500ul KB 12000r 1min 弃废液-洗蛋白

+500ul DNAbuffer 12000r 1min 弃废液-洗杂

重复+500ul DNAbuffer 12000r 1min 弃废液-洗杂

开盖空转 12000r 2min

将柱子转移到干净1.5ml中，加30ul EB 静置1min后12000r 1min

3.安全注意事项

EB致癌物

4.可能出现的现象

下面步骤来自实验室的试剂盒，不同试剂盒步骤不一样。质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法、煮沸法、酚氯仿裂解法，该试剂盒使用的是碱裂解法（说明书 ）。此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下：

1. 接种新鲜的单个菌落到 1-5 mL LB 培养基（含适量抗生素）， 37℃震荡培养 14-16 h。 注：不建议培养时间超过 16 h，可能会导致大肠杆菌裂解从而降低质粒 产量。大肠杆菌分大摇小摇，挑单的菌需先小摇后大摇

或接 1%-5% 含质粒的大肠杆菌细胞液体于 LB培养基。

Q如果摇菌时间过长，会出现什么问题？细菌死亡还是？？？

A可能导致菌裂解，这样会降低产量，不能超16h。

注：请勿从冻存的甘油菌直接培养。

注：此步骤适用于 LB 培养的大肠杆菌，当使用 TB 或者 2xYT 培养基时， 需要特别注意 OD600不要超过 3.0。当使用了过量的培养基，对应的 Buffer 的体积需要对应增加。

2. 12,000 rpm 离心 1 min，弃上清，将管子倒置于纸巾上，去除 残留培养基。 注：残留的液体培养基容易导致菌体裂解不完全，从而降低产量。

3. 加入 250 μL Buffer A1 (使用前加入 RNase A)，用移液器或涡 旋震荡仪充分悬浮细菌细胞。 注：充分重悬有利于菌体裂解和中和。

缓冲液A1是碱性的，有渗透压，容易使细胞裂解，缓冲液B1使得细胞裂掉、变透明，缓冲液N1是酸性的，将溶液给中和过来的，诱导蛋白质沉淀将最后提取出来的质粒测浓度时，加EB的溶液要用EB作为空白参照物来测，加水的溶液要用水作为空白参照物来测。

4. 加入 250 μL Buffer B1，轻轻地反转 10 次以混匀（不要涡旋）， 室温静置 5 min。 注：静置时间不要超过 5 min，时间过长会导致基因组污染或质粒损伤。 注：Buffer B1 低于室温会结晶，使用前在 37℃预热 Buffer B1 使沉淀溶 解。

5. 加入 350 μL Buffer N1，立即反转/振荡 5-10 次以混匀。 注：冰上静置 1 min 有助于提高得率。

6. 12,000 rpm 离心 10 min。 注：若裂解液不澄清，将管子转一个角度，再离心 5 min，将澄清的裂 解液转移至 Mini Column。

7. 小心将上清液转移至 Mini Column（自带 2 mL Collection Tube）中，避免吸到沉淀，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将 Mini Column 放回至 2 mL Collection Tube。

8. 可选：加入 500 μL Buffer KB，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤 液，将 Mini Column 放回至 2 mL Collection Tube。 注：此步骤对于 end A+菌株例如 HB101，JM110，JM101 及其衍生菌株 是必要的，而对于 end A-菌株例如 DH5α和 TOP10 是不必要的。

9. 加入 500 μL DNA Wash Buffer (使用前按要求加入乙醇)， 12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。 可选：重复步骤 9。

10. 将 Mini Column 开盖放回至 2 mL Collection Tube，12,000 rpm 离心 2 min。 注：残留的乙醇可通过打开柱盖离心的方式去除，乙醇是否去除干净将 会影响最后的洗脱效率。

11. 将 Mini Column 转移至一个干净的 1.5 mL 离心管，在膜中 央加入 50-100 μL（50 μL）Elution Buffer 或 ddH2O，静置 1 min， 12,000 rpm 离心 1 min 洗脱质粒 DNA。

可选：将洗脱下来的液体重新上柱，二次洗脱。

注：第一次洗脱通常得到 70%左右的质粒。二次洗脱有利于回收剩下 20~30%的质粒 DNA。

注：纯化得到的质粒 DNA 可直接用于下游实验例如基因克隆、RFLP、 文库筛选、体外翻译、测序等。

注：若用于内毒素敏感细胞系、原代细胞的转染及显微注射，建议购买 PD1212。

12. DNA 浓度可通过以下方式计算，

DNA 浓度（μg/mL）=OD260nm×50×稀释倍数