PLA的工作原理（pla原理步骤）

一、邻位连接技术（

）的工作原理？

PLA的工作原理（pla原理步骤）

Duolink

邻位连接技术

是一种高特异性、高灵敏地原位检测内源性蛋白、蛋白修饰和蛋白互作的强大工具

该技术可轻松检测和定位未改造细胞和组织内单分子级别的蛋白靶标。一般先使用不同种属来源的两种一抗检测两个蛋白靶标（图

）。接着用一对寡核苷酸标记的二抗（

探针

邻位探针）结合一抗（图

）。再加入连接寡核苷酸，当一对邻位探针足够贴近时，连接寡核苷酸会与邻位探针对互补杂交，在连接酶的作用下形成封闭的环状

，作为滚环扩增

的模板（图

）。接着

聚合酶以

探针为引物，以上述环状

为模板，通过

反应合成连环序列（图

）。这使仍与

探针相连的序列信号扩大

倍，方便进行信号定位。最后，用标记寡核苷酸与扩增子内的互补序列杂交（图

），在荧光显微镜下表现为散点（

信号），实现可视化和定量分析（图

）。

技术可结合免疫荧光（即绿色、红色、远红或橙色检测）或免疫组化（即过氧化物酶催化反应）检测贴壁细胞、细胞离心涂片和组织切片。此外，

技术还可结合流式细胞术检测血液或悬浮细胞，也可采用多孔板（例如，

或

孔板）搭配高内涵筛选成像仪进行高通量分析。

的高特异性、灵敏度和多功能性使其成为信号通路分析、药物筛选、

测定和靶标验证的理想选择。

二、DUOLINK邻位连接技术检测

EGFR

和

HER2

二聚化？

表皮生长因子受体（

EGFR

，

ErbB1

，

HER1

）和人表皮受体

2

（

HER2

，

ErbB2

，

Neu

）的二聚化是一种蛋白质相互作用（

PPI

）。

EGFR

和

HER2

是受体酪氨酸激酶

ErbB

家族的成员，在细胞分裂和死亡调控中起重要作用。影响其中任意一种蛋白质的表达或活性的突变与多种癌症的发生发展有关。当配体（如

EGF

）结合

EGFR

的胞外结构域时，

EGFR

受体激活并自磷酸化细胞质尾区。从而与

ErbB

家族其他成员形成同源

(EGFR-EGFR)

和异源（例如，

EGFR-HER2

）二聚体（图

2

）。二聚化及之后的磷酸化发生后，会募集一些衔接蛋白，进一步激活几个胞内信号通路，最终可调节基因转录，导致肿瘤细胞的增殖、血管生成、侵袭、转移和抗凋亡。