双分子荧光互补（双荧光染色法）

双分子荧光互补

近日，双分子荧光互补，中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学研究所副研究员陈明海和中科院生物物理研究所研究员、深圳先进院合成所客座研究员张先恩创建了一种串联双分子荧光互补方法，基于光敏色素蛋白IFP2.0，双分子荧光互补，合成荧光增强型近红外分子生物传感系统，使活体内和活细胞中蛋白质强相互作用、弱相互作用信号分别增强1.48和400倍，相关研究成果以Atandemnear-infraredfluorescencecomplementationsystemwithenhancedfluorescenceforimagingprotein–proteininteractionsinvivo为题，发表在Biomaterials上。

双荧光染色法

中国科学院植物研究所王雷研究组通过植物活体发光实验结合生物钟表型的计算分析发现，与动物中作为O-β-N-乙酰葡糖胺修饰转移酶（O-GlcNAc）的SEC参与调控生物钟周期不同，在植物中则主要是作为O-岩藻糖基化（O-Fucrose）修饰转移酶的SPY特异调控生物钟周期。通过构建细胞核和质特异定位的SPY蛋白表达载体，结合植物活体发光的实验证据，发现SPY蛋白主要是在细胞核中参与调控生物钟周期。进一步通过免疫共沉淀结合质谱分析、酵母双杂交以及双分子荧光互补等筛选SPY蛋白的互作蛋白组，发现SPY蛋白的TPR结构域可以与生物钟核心组分PRR5蛋白的C-端在细胞核内互作，并将其O-岩藻糖基化。细胞学观察和生化分析结果表明O-岩藻糖基化修饰不改变PRR5亚细胞定位，但会促进PRR5蛋白的降解，这也是首次发现O-岩藻糖基化可以调控蛋白稳定性。遗传学证据表明PRR5在遗传上位于SPY的下游发挥作用。该研究结果表明尽管O-糖基化调节生物钟周期在演化上具有保守性，其在哺乳动物中主要是通过O-GlcNAc糖基化修饰，而在高等植物中则是通过O-岩藻糖基化修饰，为翻译后修饰精细调控生物钟周期提供了新见解。

双荧光互补实验

中国科学院植物研究所王雷研究组通过植物活体发光实验结合生物钟表型的计算分析发现，与动物中作为O-β-N-乙酰葡糖胺修饰转移酶（O-GlcNAc）的SEC参与调控生物钟周期不同，在植物中则主要是作为O-岩藻糖基化（O-Fucrose）修饰转移酶的SPY特异调控生物钟周期。通过构建细胞核和质特异定位的SPY蛋白表达载体，结合植物活体发光的实验证据，发现SPY蛋白主要是在细胞核中参与调控生物钟周期。进一步通过免疫共沉淀结合质谱分析、酵母双杂交以及双分子荧光互补等筛选SPY蛋白的互作蛋白组，发现SPY蛋白的TPR结构域可以与生物钟核心组分PRR5蛋白的C-端在细胞核内互作，并将其O-岩藻糖基化。细胞学观察和生化分析结果表明O-岩藻糖基化修饰不改变PRR5亚细胞定位，双分子荧光互补，但会促进PRR5蛋白的降解，这也是首次发现O-岩藻糖基化可以调控蛋白稳定性。遗传学证据表明PRR5在遗传上位于SPY的下游发挥作用。该研究结果表明尽管O-糖基化调节生物钟周期在演化上具有保守性，其在哺乳动物中主要是通过O-GlcNAc糖基化修饰，而在高等植物中则是通过O-岩藻糖基化修饰，双分子荧光互补，为翻译后修饰精细调控生物钟周期提供了新见解。