暗场显微镜（近场光学显微镜）

各位老铁们好，相信很多人对暗场显微镜都不是特别的了解，因此呢，今天就来为大家分享下关于暗场显微镜以及近场光学显微镜的问题知识，还望可以帮助大家，解决大家的一些困惑，下面一起来看看吧！

本文主要内容一览

• 1、临床样本检测会被查吗
• 2、奥林巴斯金相显微镜都有哪些优势
• 3、暗视野显微镜分辨率
• 4、照片在获奖照片中凝视着闪闪发光的昆虫眼睛和闪闪发光的蜘蛛宝宝

暗场显微镜（近场光学显微镜）

1临床样本检测会被查吗

临床样本检测如果有问题会被查，没有问题当然就不会被查了。在几分钟内快速检测出致病菌是控制传染病的关键。然而，由于临床样品中病原菌的基质复杂，且真实样品中细菌丰度较低，因此快速检测病原菌仍是一项颇具挑战性的任务。

2022年9月26日，南京医科大学方一民团队在PNAS 上在线发表题为“Label-free single-particle imaging approach for ultra-rapid detection of pathogenic bacteria in clinical samples”的研究论文，该研究利用反射增强暗场成像技术实现了自由溶液中单个细菌散射强度的追踪和散射光斑的特征分析，从而实现临床样本中细菌特征形貌的识别。

在此基础上，利用微区加热产生对流实现了显微镜微小观察区域内细菌的快速筛查。总之，该方法成本较低，且避免了复杂的前处理和信号放大等步骤，可在10分钟内完成临床样本中细菌的快速、准确筛查，为临床样本中细菌的快速检测提供新的策略。

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细菌感染是导致死亡的主要原因之一。近年来，因抗生素处方不当而产生的细菌耐药性引起了医学界和公众的广泛关注。因此，早期快速检测致病菌不仅能挽救生命，而且大大减少了因耐药细菌的疾病传播而产生的医疗费用，对传染病控制和精准医疗具有重要意义。目前致病菌检测的方法主要有细菌培养法和核酸检测法（PCR）。

细菌培养法虽然成本低但耗时长，无法满足现场检测的需求；PCR方法检测灵敏度高、耗时较短，但检测成本高，难以指导用药。其它检测技术如荧光、电化学等方法往往需要分离、孵育和信号放大等复杂的前处理步骤，也难以实现临床样本中细菌的快速检测。因此，在几分钟内快速检测出临床样品中的细菌非常具有挑战性。

无标签单粒子光学成像技术不需要孵育就具有极高的灵敏度和速度，是解决这一挑战的潜在方法之一。目前已被用于基于单细菌运动或基于自由溶液散射成像方法的快速抗菌药敏测试。然而，对于直接的细菌检测，其挑战在于如何识别目标粒子的特异性以及在低浓度下和小视场(约100 × 100 μm)内的低密度限制的速度。首先，细菌的大小在亚微米到几微米之间，接近于光学衍射极限，很难进行直接形态学鉴定。其次，无标签的单粒子成像方法，如表面等离子体共振显微镜(SPRM)和干涉散射显微镜(iSCAT)的灵敏度可达单蛋白水平。然而，它们需要在检测之前将粒子结合到界面上，孵育时间很长。此外，光学显微镜由于视野小，通常只能检测到样本中非常小的一部分，因此在大体积中检测单个细菌仍然具有挑战性。

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单粒子成像方法的细菌检测原理示意图（图源自PNAS ）

为了应对这些挑战，该团队利用反射增强暗场散射显微镜(REDFSM)技术，直接识别游离溶液中的单个细菌，不需要使用任何昂贵的生物试剂。REDFSM通过跟踪单个粒子的散射强度变化，可以直接识别尺寸小于衍射极限的单个粒子的形态异质性，可用于复杂基质中细菌的直接形态识别。此外，自由溶液中对流的操作可以在小视场内快速筛选低丰度细菌，显著提高单粒子检测的灵敏度，使临床样品中超低浓度细菌的直接检测成为可能。

B组链球菌(GBS)是一种常见于孕妇体内的致病菌。GBS母婴垂直传播一般发生在分娩过程中，可能导致一系列新生儿疾病甚至死亡。然而，用细菌培养法检测GBS需要2天，不能准确反映分娩时的GBS状态。因此，在短时间窗口内进行产室内GBS筛查有助于适当的抗生素治疗，降低医院成本，并防止细菌对抗菌素产生耐药性，这对于产科的临床应用至关重要。该研究以阴道拭子中GBS检测为例，展示了这种无标签单粒子成像方法在不使用任何生物试剂的情况下，可在10 min内直接筛查临床样本中的GBS，具有灵敏度高、快速、简单、成本低的优点，在临床快速诊断中具有广阔的应用前景。

暗场显微镜（近场光学显微镜）

2奥林巴斯金相显微镜都有哪些优势

奥林巴斯金相显微镜的优势是可以应用在质量控制，对新开发的材料、电子设备、金属和化学制品等都可以进行详细的检测。它检测快捷、功能先进，采用组合观察方法获得较为出色的图像，同时可以轻松地生成全景图像和全聚焦图像，对于明亮区域和暗光区域也能进行很好的采集，非常方便观察。奥林巴斯金相显微镜还具有符合行业标准要求的金相分析，这也是专为材料科学而设计的软件，在我的工作中，也为我提供了许多便捷。

3暗视野显微镜分辨率

暗视野显微镜分辨率普遍光学显微镜的最高分辨率为0.2μm，而暗视野显微镜虽然对样品的细节构造分辨不清楚，但却可看到0.004μm以上微细颗粒的存在，即可以看到亚显微结构，特别适合用来观察微细的颗粒与细菌等。

以自然光或灯光为光源，显微镜的最大分辨率为波长的一半，即0.25μm。暗视野显微镜多用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。

普通通光镜最大分辨率为0.2μm，暗视野显微镜则可分辨0.004～0.2μm的微粒，适用于观察细胞内线粒体运动及标本中细菌等微粒的运动等。

暗视野显微镜：暗视野显微镜是用特制的暗视野集光器代替普通光学显微镜上的明视野集光器，由于暗视野集光器的中央为不透光的遮光板。

暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02—0.004暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线。

暗视野实际是暗场照明。它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此，视场为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的像。

暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。

暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图像。暗视野观察的分辨率远高于明视野观察。

4照片在获奖照片中凝视着闪闪发光的昆虫眼睛和闪闪发光的蜘蛛宝宝

，摄影师YousefAl-Habshi在2018年NikonSmallWorld摄影大赛中以20倍放大率使用反射光记录Metapocyrtus的眼睛图像而获得第一名四分体甲虫。[了解更多有关2018年尼康小世界冠军的信息]

来自巴拿马巴拿马城的RogelioMoreno使用放大10倍的自荧光摄影技术，在摄影比赛中获得第二名。这张图片展示了一种蕨类植物，其结构能够产生和包含孢子。

摄影师、伊利诺伊州纳珀维尔的SauliusGugis在2018年尼康小世界摄影大赛中获得第三名。在泡泡房里，一个小飞虱若虫的图像使用了5倍放大倍数的聚焦叠加。

在2018年尼康小世界摄影大赛中获得第四名，来自土耳其伊兹密尔的摄影师CanTuner，拍摄了这张孔雀羽毛的照片。这张图片是用焦距叠加的方式放大5倍制作的。

，摄影师泰莎·蒙塔格（TessaMontague）在尼康小型世界摄影大赛（NikonSmallWorldphotographycompetition）上，使用共焦摄影技术，以20倍的放大倍数拍摄了蜘蛛胚胎——拟蜘蛛（Parasteatodatepidariorum）的这张照片，获得第五名。这张图片显示的是粉红色的胚胎表面，蓝色的细胞核和绿色的微管。

来自法国巴黎眼病研究中心治疗学系视觉研究所，哈南·卡布用荧光和40倍放大率在摄影比赛中获得第六名。这张图片展示的是灵长类动物foveola——视网膜的中心区域，马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯医学院（JohnsHopkinsSchoolofMedicine）的

摄影师诺姆·巴克（NormBarker）在2018年尼康SmallWorld摄影大赛中获得第七名。这张人泪俱下的照片利用了暗场技术——在未染色的标本上形成对比——放大5倍。

在2018年尼康小世界摄影大赛中获得第八名，是西澳大利亚州***的PiaScanlon，第一产业与区域发展部。斯坎伦提交了这幅曼氏胸鱼的肖像，也被称为芒果种子象鼻虫。利用立体显微镜和图像叠加产生显著的细节，斯坎龙仅以1倍放大率展示了这只小昆虫。

来自希腊雅典的HarisAntonopoulos使用暗场epi照明反射光显微镜获得了第9名。安东诺普洛斯用10倍的放大倍数来记录这张安全全息图。

，CsabaPintér用3倍放大倍数的聚焦叠加摄影技术拍摄在摄影比赛中排名第十。这张图片展示了覆盖着花粉粒的植物茎。

摄影师尼莱·坦尼娅和田纳西州纳什维尔范德比尔特大学细胞与发育生物学系的迪伦·伯内特，2018年尼康小世界第11名d摄影比赛。他们用60倍放大的结构光显微镜拍摄了一个正在进行细胞分裂的人成纤维细胞（结缔组织细胞）。图像中肌动蛋白呈灰色，肌球蛋白II呈绿色，DNA呈洋红色。

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