反转录试剂盒（mmlv反转录试剂盒）

反转录试剂盒

模板的质量直接影响到检测性能。核酸提取需要有效地将RNA或DNA从其他混合物中分离。RNA样本中的污染物——基因组DNA、DNA结合蛋白、酚类化合物或在提取RNA过程中引入的外源杂质(如手套中的粉末)——都已被证明会抑制下游实验，反转录试剂盒，如逆转录和PCR扩增。核酸提取需要使用无菌无酶的试剂耗材，避免RNase或DNase污染，并对内源RNAse或DNAse进行有效抑制；多糖多酚样品要考虑多糖多酚杂质的有效去除。低温保存防止RNA或DNA降解。

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降解或不纯的RNA会限制逆转录反应的效率，降低产量。部分降解的RNA可能不能给出准确的基因表达结果。对于基因的定量，必须使用高质量的RNA，这意味着需要非常仔细地检查RNA的浓度和质量。可采用高分辨率琼脂糖凝胶检测核酸质量和分光光度法（A260/A280=1.8和A260/A230=2.0）检测核酸纯度和浓度。

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拿到合成的引物之后，我们就可以进行目的基因的扩增了。合成目的基因通常是以目标物种的基因组为模板。由于真核生物的基因组中存在内含子序列，在mRNA的剪接加工过程中被切除，因此，在构建真核基因克隆时基因组DNA不能直接用作PCR扩增的模板，只能从细胞或者组织中提取总RNA或者mRNA，反转录cDNA作为模板通过PCR扩增目的基因。

4、从细胞中提取总RNA4.1从细胞培养箱中取出已经长满细胞的细胞培养皿，小心吸出培养基，加入4ml预冷PBS，倾斜细胞培养皿3次以充分洗涤细胞，然后小心吸尽PBS溶液。4.2培养皿中加入1mlTrizol试剂裂解细胞，冰上静置5min，枪头吹打，室温静置5min；4.3将细胞裂解液吸到1.5mlEP管中，加入氯仿0.2ml，震荡仪震荡15s。4.4室温静置2-3min，12000xg，4℃，15min离心。4.5离心后液体分为三层（上层无色为RNA，中层为DNA，底层为蛋白质），小心吸取上层无色液体至新的EP管中。4.6加入等体积异丙醇，混匀，冰上静置10min，12000xg，4℃，10min离心。4.7此时在管底可见RNA白色沉淀，弃去上清。4.8加入75%乙醇1ml，反转录试剂盒，震荡仪震荡30s，7500xg，反转录试剂盒，4℃，5min离心。4.9小心去上清，管内沉淀在超净台中鼓风静置干燥3-5min。4.10加入20ulDEPC水溶解。水浴或者加热器55-60℃，10-15min。4.11测定纯度和浓度。吸光度A260/280比值接近2表明纯度较高。部分相关产品

反转录试剂盒说明书

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