二抗孵育时间（二抗孵育条件）

其实二抗孵育时间的问题并不复杂，但是又很多的朋友都不太了解二抗孵育条件，因此呢，今天小编就来为大家分享二抗孵育时间的一些知识，希望可以帮助到大家，下面我们一起来看看这个问题的分析吧！

本文主要内容一览

• 1、二抗4度过夜孵育可不可以
• 2、二抗4度孵育时间
• 3、如何检测二抗是否失效
• 4、二抗不显影了能重新孵育二抗吗
• 5、一抗孵育完可以过多久再孵二抗
• 6、孵完二抗之后要洗吗

二抗孵育时间（二抗孵育条件）

1二抗4度过夜孵育可不可以

可以。二抗室温或37度30min-1h，浓度有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳，二抗4度过夜孵育可以。孵育，汉语词语，解释为孵；孵化。

二抗孵育时间（二抗孵育条件）

2二抗4度孵育时间

二抗4度孵育时间是37度1-2h。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度，一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳。孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜(从冰箱拿出后37度复温45min)。

3如何检测二抗是否失效

用稀释好的二抗点在空白膜上。如何检测二抗是否失效需要用稀释好的二抗点在空白膜上，出现空白就代表失效了。适当提高抗体浓度，优化孵育条件，保证抗体孵育箱温度为37℃，或增加孵育时间，如4℃孵育48小时。

4二抗不显影了能重新孵育二抗吗

二抗不显影了可以重新孵育二抗。电泳没问题的话能够显出条带的，但整体亮度要弱些。一抗没问题的话，下次可以加个阳性蛋白做对照，可以看看哪里出问题了。但二抗一般孵育1-2小时就足够了，再次孵育也不太可能有改变。二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体（如IgG、IgM或IgA等）均具有反应性。

5一抗孵育完可以过多久再孵二抗

1、一抗的定义

一抗指的是能够和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白，也就是平常所说的抗体。二抗指的是能和抗体结合的抗体，主要用于检测抗体的存在，放大一抗的信号。

2、一抗的孵育时间

(1)一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37°C的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4°C的条件下，孵育18-24小时左右。

(2)如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。

6孵完二抗之后要洗吗

western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深 一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体，抗体结合上就不容易洗掉了。

洗膜不完全背景会深，但洗膜时间延长并不能完全去除背景。