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考马斯亮蓝法测蛋白质含量

蛋白质作为生命活动的物质基础之一，考马斯亮蓝法测蛋白质含量，也是生命活动的主要承担者，是科研工作中的重要研究对象。而在这些精细化研究工作中，考马斯亮蓝法测蛋白质含量，蛋白定量是蛋白分离和分析前必须的一个重要步骤，蛋白色谱分离、蛋白质电泳分析、蛋白质免疫分离和分析、细胞裂解释放的总蛋白定量、蛋白分子的标记、蛋白结构分析等，都需要可靠的定量分析作为基础。依托不同的科学原理，目前已经发展出多种不同的蛋白测定方法，其中BCA法、Bradford法和紫外法在科研实验中应用最为广泛。

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下面我们介绍几种常用的定量方法：

比色法

通常蛋白定量使用的方法是比色法，通常用于总蛋白的定量分析。根据蛋白和比色试剂的结合，可以将比色法分为：蛋白-染料结合法和蛋白-铜螯合化学试剂法。前者对应的典型蛋白定量比色法是Bradford法，后者则包括双缩脲法，Lowry法，BCA法。

考马斯亮蓝法测蛋白质含量用什么比色皿

在实验室，我们经常会做到蛋白质的SDS—PAGE。跑蛋白电泳，我们都知道最主要的就是需要知道蛋白的分子量的大小，这样跑完电泳后通过与Marker的比对，我们才可以知道目的条带的位置，通过考马斯亮蓝染色来分析蛋白样品中是否有目的蛋白，从而为我们进一步的实验提供依据。

对实验新手来说，他们对于蛋白质的分子量的表示以及怎样计算都一头雾水，首先我们谈一下蛋白质分子量的表示。蛋白质分子量的单位为kDa（简称为kD），人们为了纪念道尔顿，以他的名字作为原子质量单位。在生物化学、分子生物学和蛋白组学中经常用D或KD，定义为碳12原子质量的1/12，1D=1/Ng，N为阿伏加德罗常数。

接下来我们就来说说如何计算某基因表达的蛋白质的分子量：

考马斯亮蓝法测蛋白质含量原理

Westernbotting实验中，样品一旦准备好，样品蛋白质通过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离，考马斯亮蓝法测蛋白质含量，这可以在天然或变性条件下进行。蛋白质印迹指南的这一部分详细介绍了您在分离蛋白质时可能需要考虑的事项。

本文主要涉及以下几个方面：·聚丙烯酰胺凝胶·缓冲液pH值·用分子量标记确定蛋白质大小·阴性组织对照·上样对照

SDS-PAGE通常用于WB实验，其中蛋白质被变性及还原以获得它们的初级结构。用SDS分子（Sodiumdodecylsulfate）包被会产生与其分子量成正比的相对负电荷，从而允许仅按大小分离蛋白质。NativePAGE的使用（不加入SDS疏基乙醇等变性剂的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳），一般常用于观察不同的蛋白质特征。它很少被进一步使用在WB实验中，更常见的是用考马斯或银染色。NativePAGE中的蛋白质迁移率取决于电荷和流体动力学的大小，这些因素都是由多肽折叠决定的。以特定方式折叠的小蛋白质可能比更大、更紧密折叠的多肽具有更大的流体动力学尺寸。此外，考马斯亮蓝法测蛋白质含量，可以保留多聚体结构。